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影响高效毛细管电泳色谱仪谱带展宽的因素

2022-04-27 来源:福州机械信息网

影响高效毛细管电泳色谱仪谱带展宽的因素

影响高效毛细管电泳色谱仪谱带展宽的因素有焦耳热、扩散和吸附等。

一、焦耳热:

电流通过毛细管内的缓冲液时产生的自热称为焦耳热。

焦耳热通过管壁向周围环境散热,管中心温度较高,由中心向管壁温度逐渐下降。温度高,粘度小,因而管中心的组分迁移较快,管壁附近的组分迁移较慢,破坏了溶质带的扁平塞子流型,导致谱带展宽。

大内径毛细管,电阻小,电流大,产生的焦耳热多,且不易散热。小内径毛细管散热面积大,温度梯度小,谱带展宽小。但内径过小会带来进样和检测等困难,又易造成柱堵塞。因此,目前多采用内径25~75μm的毛细管。

二、扩散:

扩散是物质分子由高浓度区域自发迁移到低浓度区域的过程。扩散会引起谱带展宽。

扩散系数小的物质,谱带展宽较小。

三、吸附:

溶质与毛细管壁之间存在吸附和疏水作用,使迁移速度减慢,造成谱带展宽。

造成管壁吸附的主要原因:

1、电解质溶液pH>3时,石英毛细管壁带负电荷,因静电引力,溶质阳离子被管壁吸附。

2、蛋白质和多肽带电荷数多,有较多的疏水基,疏水作用较强,是目前分离分析该类物质的一大难题。在pH<3时,管壁呈电中性时尤为明显。

小内径毛细管有利于散热,但比表面积大(柱内表面积和体积之比),会使吸附增加,引起谱带展宽大。

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